La chromatographie sur couche mince est une méthode d'analyse chimique basée sur l'utilisation d'une couche absorbante d'une épaisseur de 0,1 à 0,5 mm comme phase stationnaire. La méthode CCM peut être utilisée dans divers domaines et permet la détermination d'une grande variété de composés chimiques.
Principe de la méthode
La méthode de chromatographie sur couche mince est née de la chromatographie sur papier et les premières expériences ont été réalisées dans les années 80 du 19ème siècle. L'utilisation active de cette analyse n'a commencé qu'après 1938.
La technique TLC comprend une phase mobile (éluant), une phase stationnaire (sorbant) et un analyte. La phase stationnaire est appliquée et fixée sur une plaque spéciale. La plaque peut être en verre, en aluminium ou en plastique - ce sont des substrats réutilisables qui doivent être soigneusement lavés, séchés et préparés pour l'application du sorbant après chaque utilisation. Il est également possible d'utiliser des assiettes en carton qui sont jetées après usage.
Le gel de silice est le plus souvent utilisé comme phase stationnaire, mais il est possible d'utiliser d'autres sorbants, par exemple l'oxyde d'aluminium. Lors de l'utilisation de tel ou tel sorbant, la technologie doit être strictement respectée pour que le résultat soit précis, par exemple, car le gel de silice peut donner un résultat erroné si l'air du laboratoire est trop humide.
Des solvants sont utilisés comme phase mobile, par exemple l'eau, l'acide acétique, l'éthanol, l'acétone, le benzène. Le choix d'un solvant doit être pris de manière responsable, car le résultat de la chromatographie dépend directement de ses qualités (viscosité, densité, pureté). Un solvant individuel est sélectionné pour chaque échantillon analysé.
Une analyse
L'échantillon doit être dilué dans un solvant. Si la dissolution complète ne se produit pas et qu'il reste trop d'impuretés, l'échantillon peut être nettoyé par extraction.
L'application de l'échantillon sur la plaque peut se faire automatiquement ou manuellement. L'application automatique utilise une méthode de microspray où chaque échantillon est pulvérisé sur la zone appropriée du substrat. Pour l'application manuelle, une micropipette est utilisée. Des marques de crayon sont placées sur la plaque pour chaque échantillon. Chaque échantillon est appliqué avec un capillaire sur la plaque en une ligne à une distance suffisante des repères pour ne pas réagir avec le carbone du plomb.
La plaque est placée dans un récipient, au fond duquel l'éluant est versé. Le support est placé avec un bord dans le récipient jusqu'à la ligne marquée. Le récipient est hermétiquement fermé pour éviter l'évaporation de la phase mobile. Sous l'action des forces capillaires, l'éluant commence à remonter la couche sorbante. Lorsque l'éluant atteint un certain niveau, la plaque est retirée du récipient et séchée.
Si la substance souhaitée n'a pas de couleur, elle ne sera pas visible sur le substrat. Par conséquent, la visualisation est effectuée - traitement de la plaque avec de la vapeur d'iode ou d'autres colorants.
Après un tel traitement, le résultat est évalué. Des zones colorées d'intensité variable apparaissent sur le sorbant. Pour déterminer une substance (ou un groupe de substances), les zones colorées, leur taille, leur intensité et leur mobilité sont comparées à un échantillon de référence.
La méthode TLC est largement utilisée car elle est rapide, bon marché, précise, intuitive, ne nécessite pas d'équipement complexe et est facile à interpréter.
